恆溫環狀擴增法在動植物防檢疫之應用(農委會) | 台灣美食網
近年有一種新的生化方法--恆溫環狀擴增法(LAMP,Loop-mediatedisothermalAmplification),逐漸被應用在疫病蟲害的檢測上,反應時間雖然沒有比其它方法大量的縮短,但 ...
防檢局 汪澤宏․宋嘉軒
一、前言
目前在動植物防檢疫上的診斷鑑定上,除了傳統的形態鑑定及病徵診斷外,生化、生理等技術亦被廣泛的應用,諸如酵素連結免疫吸附法(ELISA)、聚合酶連鎖反應(PCR)技術以及生物晶片(biochip)。其中,以聚合酶連鎖反應的應用最為廣泛,如逢機增幅多態型-聚合酶連鎖反應(RAPD-PCR)、聚合酶連鎖反應-限制性片段長度多態性(PCR-RFLP)、多重聚合酶連鎖反應(Multiplex PCR)、巢式聚合酶連鎖反應(Nested PCR)、序列特徵化增幅區域(SCARs)以及即時聚合酶連鎖反應(Real-time PCR)等。近年有一種新的生化方法--恆溫環狀擴增法(LAMP, Loop-mediated isothermal Amplification),逐漸被應用在疫病蟲害的檢測上,反應時間雖然沒有比其它方法大量的縮短,但整體操作較為簡便,也可兼顧到準確度、敏感度的優點。
二、LAMP原理與方法
恆溫環狀擴增法是日本學者Notomi等人於2000年所發表的一種新的核酸分子檢測技術。LAMP技術與PCR技術主要不同之處在於前者可以在恆溫下反應,所以只需要溫度能達到60-70?a C的簡單恆溫儀器,如水浴槽(water bath)或加熱板(heat block)。 LAMP 反應需要3組引子對(primers),分別為外引子對(outer primers)、內引子對(inner primers)以及環狀引子對(loop primers),其中的引子對必須針對目標物序列的特異區而加以設計,這樣檢測目標物才會具有專一性。而反應中除了引子對外,尚要加入Bst DNA聚合酶,這是從一種細菌(Bacillus stearothermophilus)所純化生產的酵素,它可在一個最適溫度(60-65?a C)與上述的引子對進行聚合作用,增幅出具有自我互補能力的DNA片段,形成具有莖環(stem-loop)的啞鈴型結構,藉此連續且重複反應,產生大量的DNA片段,在反應的過程中會有焦磷酸的釋放,與反...
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